1、大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌检验方法
（1）大肠菌群（coliforms）
一群在36℃培养48h可发酵乳糖产酸产气、需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
该菌主要来源自人畜粪便，作为粪便污染指标评价食品的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能。
（2）粪大肠菌群（Fecal colifoms）
也称耐热大肠菌群。指大肠菌群中能在44.5℃生长、发酵乳糖产生气体的一群细菌。
与大肠菌群一样，并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某-一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的-组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。
食品卫生学意义：作为粪便污染食品的指标菌，MPN值愈低则说明食品受粪便污染程度及对人体健康危害程度愈低
作为肠道致病菌污染食品的指针，大肠菌群数量越多则肠道致病菌存在的可能性就越高，但两者之间并不总是呈平行关系。
（3）大肠埃希氏菌（Escherichia coli）
分类学概念：肠杆菌科、埃希氏菌属。是人和温血动物肠道内普遍存在的细菌，是粪便中的主要菌种。一般生活在人大肠中并不致病，但它侵入人体一些部位时，可引起感染。
主要有：
■O抗原(菌体抗原，150个)
■K抗原(荚膜抗原，90个)
■H抗原( 鞭毛抗原，50个)
（4）致泻性大肠埃希氏菌
能侵入肠粘膜上皮细胞,引起食物中毒的大肠埃希氏菌。产毒性大肠埃希氏菌(ETEC)-肠胃炎、旅行性腹泻。
■致病性大肠埃希氏菌(EPEC)-婴儿腹泻；
■肠出血性大肠埃希氏菌(EHEC)--出血性结肠炎；(O157∶H7；O104∶ H4；O111；O126等)
■侵袭性大肠埃希氏菌(EIEC)—杆菌性痢疾；
■粘附性大肠埃希氏菌(EAEC)—急慢性腹泻。
2、大肠菌群、粪大肠菌群、大肠埃希氏菌的关系
3、相关检验方法标准
■GB4789.3-2016食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数
■GB 4789.38-2012食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌计数
■GB 4789.39-2013食品安全国家标准食品微生物学检验粪大肠菌群计数
■GB4789.6-2016食品安全国家标准食品微生物学检验致泻大肠埃希氏菌检验
■GB4789.36-2016食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌O157:H7/NM检验。
4、大肠菌群和粪大肠菌群的检测流程图
5、大肠菌群计数检验的操作
MPN法：
6、结果报告
根据经确证后的对应浓度阳性管数查MPN表（MPN：最可能数，基于泊松分布的一种间接计数方法）
7、VRBA平板计数法
8、结果报告
经最后证实大肠菌群阳性的BGLB试管比例乘以VRBA菌落数再乘以稀释倍数，即为每克（毫升）样品中大肠菌群数。
如：稀释倍数 10 -3 ,吸取样品稀释液1ml平板典型或可疑菌落数100挑取10个典型或可疑菌落接种BGLB→阳性6管
9、大肠埃希氏菌MPN计数法检验程序
10、大肠埃希氏菌在EMB上的菌落形态
具黑色中心有光泽或无光泽的典型菌落。
11、靛基质试验(呵噪试验)(I)
■原理：某些细菌能分解蛋白质生成呵器，呵跺与对二甲基氨基苯醛结合，形成玫瑰呵噪红色化合物。
■培养基：色氨酸肉汤。
12、甲基红反应(MR)
肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖,在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解中,由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸,琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基PH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红。
■培养基：MR-VP培养基。
13、V-P试验(VP)
某些细菌在葡萄糖蛋白陈水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白陈中的肌基生成红色化合物，称V一P（+)反应。
36℃±1℃培养48h，加数滴甲基红溶液"
14、柠檬酸盐利用试验
有的细菌如产气杆菌，能利用柠檬酸钠为碳源，因此能在柠檬酸盐培养基上生长，并分解柠檬酸盐后产生碳酸盐，使培养基变为碱性。此时培养基中的溴麝香草酚蓝指示剂由绿色变为深蓝色。不能利用柠檬酸盐为碳源的细菌,在该培养基上不生长，培养基不变色。
15、大肠埃希氏菌与非大肠埃希氏菌的生化鉴别
■大肠埃希氏菌为革兰氏阴性无芽胞杆菌，发酵乳糖、产酸、产气，IMViC 生化试验为十十——或一十——。只要有1个菌落鉴定为大肠埃希氏菌，其所代表的LST肉汤管即为大肠埃希氏菌阳性。依据LST肉汤阳性管数查 MPN 表（见附录B），报告每 g (mL）样品中大肠埃希氏菌 MPN 值。
16、大肠埃希氏菌平板计数法（第二法)
17、大肠埃希氏菌平板计数
（1）选取2个～3个适宜的连续稀释度的样品匀液，每个稀释度接种2个无菌平皿，每皿1 mL。同时取1 mL稀释液加入无菌平皿做空白对照。
（2）将10 mL～15 mL冷至45℃±0.5℃的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）倾注于每个平皿中。小心旋转平皿，将培养基与样品匀液充分混匀。待琼脂凝固后，再加3 mL～4 mLVRBA-MUG覆盖平板表层。凝固后翻转平板，36 ℃±1℃培养18 h~24 h。
（3）选择菌落数在10 CFU～100 CFU之间的平板,暗室中360nm～366 nm波长紫外灯照射下，计数平板上发浅蓝色荧光的菌落。
（4）检验时用已知MUG阳性菌株（如大肠埃希氏菌ATCC 25922）和产气肠杆菌（如ATCC 13048）做阳性和阴性对照。
18、大肠埃希氏菌平板计数的报告平板计数的报告
两个平板上发荧光菌落数的平均数乘以稀释倍数，报告每g（mL）样品中大肠埃希氏菌数，以CFU/g(mL)表示。若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告。
0人已收藏
0人已打赏
免费1人已点赞
分享
阅读下一篇
新疆理化所与英国诺丁汉特伦特大学合作在纳米吸附剂去除水中有机物方面研究获得进展饮用水消毒方案显着减少了水传播疾病风险，但在此过程中产生的消毒副产物（DBP) 对生态环境和人类健康带来了严重的威胁。 地下水和地表水资源中存在一定量的天然有机物（NOM），其中腐植酸（HA）在水处理的消毒（氯化）过程中可以转化为致癌副产物，如三氯甲烷 、氯仿和二氯乙腈等。 HA本身可能成为一种危害的污染物，因为与重金属结合具有优越的结合力和静电相互作用，导致金属-有机复合物的形成，这些复合物使它们从水中的根除变得更加复杂。由于HA及其衍生消毒剂副产品相关的法规和潜在的人类健康问题，在过去的几十年，水中去除 HA的研究引起了越来越多的研究人员的强烈关注。因此，使用有效技术从水中去除 HA 是世界范围内的一个非常重要课题。
回帖成功
经验值 +10
全部回复（1 ）
只看楼主 我来说两句 抢板凳看一下。。了解下这方面的内容
回复 举报