大豆分离蛋白提取方法总结

　　1、酸沉碱提法

　　大豆分离蛋白是一种传统的分离提取方法。大豆分离蛋白法是利用大豆中大多数蛋白质在等电点(pH415)时沉淀的特性,与其他成分分离，沉淀的蛋白质经调节pH后溶解，因此称之为酸沉碱提法。酸沉碱提的缺陷是：耗酸、耗碱量大，废水处理费用高，产品收率低。该分离提取方法有待改进。但目前仍然是工业化生产的基本方法。

　　2、膜分离法

　　根据大豆蛋白的分子量大小、形状及膜与大豆蛋白的适应性，选择膜材料和不同截留分子量的膜，对大豆蛋白提取液超滤分离，超滤净化，使非截留组分排除，达到符合标准的分离大豆蛋白液，接着将净化后的大豆蛋白提取液超滤浓缩到所需的浓度后出料，喷雾干燥成粉状大豆分离蛋白。

　　3、反胶束萃取分离法

　　反胶束是表面活性剂在有机溶剂中形成的一种聚集体，其中表面活性剂的非极性尾在外，与有机溶剂接触，极性头在内，形成极性核，该核具有包含水溶液和溶解蛋白质的能力，因而可以用此含有反胶束的有机溶剂从水相中萃取蛋白质。利用反胶束技术从全脂豆粉萃取大豆蛋白，可一次萃取50%左右。大豆蛋白萃取过程非常快，用非扩散模型解释较为合理。

　　该法需要的主要仪器有：自动水分测定仪、气浴恒温震荡器、离心机、凯氏定氮仪、分析天平、恒温磁力搅拌器和微量进样棒等。

　　影响反胶束萃取过程的主要因素有表面活性剂的种类及浓度、水相的pH值、离子强度、温度等。

　　反胶束萃取技术的优点是：选择性高、操作方便、放大容易、萃取剂(反胶束)相可循环利用、分离和浓缩同步进行。其缺点是:蛋白质在现有反胶束体系中稳定性不高,导致萃取前后蛋白质的活性损失较大，因而制约其工业化应用。

　　4、反相高效液相色谱法

　　这是对大豆蛋白中7S和11S球蛋白进行快速分离的一种方法。在分离条件为40℃、流速1mL/min的条件下,9min可完成相应球蛋白的分离。具体方法为:

　　(1)试剂与试样。乙腈(CAN) (HPLC级)、三氟乙酸(TFA) (HPLC级)、HPLC级水用于移动相的制备。Tris(三甲基氨基甲烷缓冲剂)和2―巯基乙醇(分析级)用于分离大豆蛋白。大豆蛋白分离样本可为组织化蛋白、大豆粉、豆奶、强化婴儿大豆,使用前均测定其蛋白质含量。样品溶于水,然后于注样前用0122μm经无菌处理的多酚滤纸过滤。全部样品和标样保存在3℃或冰冻条件下,样品溶液在分析当天现配,并保存在冰上备用。

　　11S和7S大豆球蛋白在0130%mol/L Tris-HCl缓冲液和含有0101mol/L22巯基乙醇条件下,经高速离心(10000r/min)分别于各自的等电点(pH614和pH418)析出。

　　(2)高效液相色谱。Hewlett - Packard 1090 II型色谱仪,带有一个二极管倍增器和HP9153C型数据检测系统,每次进样20μL。分离在PLRP - S柱(150 mm ×416mm I. D. )中进行,柱中填有多聚苯乙烯-二乙烯苯颗粒(300 ! , 8 μm) , 柱留时间(117min)通过不被吸附的尿嘧啶测定,蛋白质通过254nm紫外吸光值测定。缓慢流动相A为011%三氟乙酸(TFA)水溶液;快速流动相B为011%TFA乙腈溶液。移动相经0145μm尼龙过滤器过滤,用少量氮气排气。

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