怎么建设pcr实验室？

　　pcr实验室也叫基因扩增实验室，pcr实验室有效避免在实验过程中造成试剂、标本、扩增物以及操作人员的交叉污染,保证人员安全及实验数据可靠。那么，如何建设pcr实验室？

                                                  

　　pcr实验室布局

　　要完成一组pcr实验，通常需要经过试剂配制、样品处理、核酸扩增和产物分析4个实验过程。

　　这4个实验过程的实验用房应相邻布置，组成一个独立的pcr实验区。标准的pcr实验区包括:试剂准备区、标本制备区、扩增区、产物分析区、各区配套的缓冲区及公共走廊。

　　试剂准备区

　　该实验区主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。

　　试剂和用于标本制作的材料应直接运送至该区，不得经过其他区域。试剂原材料必须贮存在本区内，并在本区内制备成所需的贮存试剂。

　　试剂准备区配备有2~8°C冰箱和-80°C冰箱，计算冷负荷时，需要将它们计算在内。

　　房间的面积宜控制在15m2~20m2。本区的压力梯度要求为:相对正压状态，以防止外界含核酸气溶胶的空气进入，造成污染。

　　标本制备区

　　该区域主要进行的操作为临床标本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定RNA时cDNA的合成。

　　标本制备区配备有2~8°C冰箱和-20°C冰箱，计算冷负荷时，需要将它们计算在内。在标本制备区，还需要配备生物安全柜，用于进行提取核酸的操作。

　　为避免提取的核酸在柜内反复循环，造成标本之间的交叉污染，出现假阳性结果，该区域配备的生物安全柜必须是B2型的。生物安全柜工作区垂直气流全部来自实验室，排风经过高效过滤器过滤后直接排至室外，不允许回到安全柜和实验室中。

　　根据经验，如果实验室内配备生物安全柜，每配备一台，实验室的面积增加10m2;标本制备区的面积宜在25m2~30m2之间。本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为正压，以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。

　　扩增室

　　该区域主要进行的操作为DNA或cDNA扩增。此外，已制备的DNA模板和合成的cDNA(来自样本制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂贮存和制备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。

　　在巢式PCR测定中，通常在第一轮扩增后必须打开反应管，因此巢式扩增有较高的污染危险性，第二次加样必须在本区内进行。

　　扩增室主要配备PCR实验室的核心仪器PCR仪，本文实例中使用了ABI7500和ABI9700两种PCR仪。

　　在实验室建造过程中，需要给PCR仪配备专门的UPS电源，以保证其正常工作。该区面积控制在15m2~20m2。

　　本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为负压，以避免气溶胶从本区漏出。为避免气溶胶所致的污染，应尽量减少在本区内的不必要的走动。个别操作如加样等应在超净台内进行。建议采用5~10Pa压差，在控制上比较容易实现。

　　产物分析区

　　该区域主要进行的操作为扩增片段的测定。

　　在室内配备通风橱，保证房间内的相对负压，空气从室外流向室内。该区面积控制在15m?~20m?。

　　本区是最主要的扩增产物污染来源，因此对本区的压力梯度的要求为:相对于邻近区域为负压，以避免扩增产物从本区扩散至其它区域。建议采用5~10Pa压差，在控制上比较容易实现。

　　正负压区域缓冲室的设置

　　根据压力梯度的要求，试剂配制室和样品处理室为相对正压，扩增室和产物分析室为相对负压，要求正压的区域和要求负压的区域的缓冲室内的压力设计大不相同。